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GST pull down

       利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此,当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离。GST-pulldown主要包括以下三个部分:①利用基因重组技术构建带有GST标签的原核表达载体;②通过原核表达系统表达带有GST标签的融合蛋白;③利用GST亲和纯化柱进行蛋白纯化获得高纯度的融合蛋白,再利用GST亲和纯化柱进行蛋白间的相互作用检测。常用的pull down方法主要有两种:一种是用带组氨酸标签的亲和纯化柱进行的,另一种是用谷胱甘肽琉基转移酶标签的亲和纯化柱进行的。GST-pull down技术主要在体外验证两种蛋白之间是否有相互作用,其用途主要有两个方面:一是证明两种已知蛋白质之间可能存在的相互作用,二是用于寻找能与已知蛋白质发生相互作用的未知蛋白。