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膜蛋白酵母双杂交文库构建

         在酵母细胞中,泛素可以分成两部分表达,即其N端部分(NubI)和C端部分(Cub),后者融合有能启动核内报告基因表达的LexA蛋白。NubI和Cub-LexA在细胞中组成可分离的泛素蛋白([NubI:Cub]-reporter)体系。Cub与LexA-VP16转录激活因子连接成Cub-LexA-VP16,当bait-Cub-LexA-VP16与prey-NubG可互作时,Cub与NubG在空间上接近发生重构,被UBPs识别,LexA-VP16被解离进入核内,使启动子下游基因(抗性筛选、蓝白斑筛选、营养缺陷型筛选等)得到转录。


服务类型实验内容交付内容周期
文库构建1.提取样本总RNA;

2.scDNA合成与扩增;

3.将dscDNA连接到pPR3载体上;

4.将连接好文库载体电转化DH10B宿主;

5.收集文库及文库质量检测

滴度在于1×10^7以上的大肠杆菌文库菌液;


质粒浓度在2-5ug/ul,提供50ug纯化质粒。

文库PCR鉴定结果图片。

2个月
文库筛选将Bait-PBT3载体转化到NMY51宿主细胞获得Bait-PBT3 NMY51细胞;


将文库质粒共转化到Bait-PBT3 – NMY51细胞;

摸索试用适当的筛选压力进行文库筛选并测序。


1-2个月